食用色素,是色素的一種,即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變?cè)蓄伾氖称诽砑觿址Q食用染料和著色劑,分為天然和人工合成兩種,合成著色劑因色澤鮮艷,著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。
chang用的食品添加有新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán) 、赤蘚紅等,《GB 5009.35-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》中規(guī)定了這7種合成著色劑的液相分析方法,7種合成著色劑中其中一種著色劑是亮藍(lán),關(guān)于亮藍(lán)的測(cè)定經(jīng)常聽實(shí)驗(yàn)員反饋亮藍(lán)旁邊總是有雜質(zhì)峰,事實(shí)真是這樣嗎?
我們一起來(lái)揭秘真相!
上機(jī)標(biāo)品
準(zhǔn)備亮藍(lán)標(biāo)品, 用水配置成10ppm。
儀器條件
色譜柱: C18-Wp(4.6mm*250mm,5um)
流動(dòng)相:A:甲醇B:0.02M乙酸銨
梯度洗脫:0min 20%A,5min 35% A,12~18min 98%A,20~27min 20%A
柱溫:25℃
波長(zhǎng):254nm
進(jìn)樣量:20ul
流速:1.0ml/min
實(shí)驗(yàn)譜圖
圖1亮藍(lán)色譜圖(色譜條件1)
圖4 亮藍(lán)色譜圖(色譜條件2)
圖5 亮藍(lán)色譜圖(色譜條件3)
結(jié)果分析
扣除溶劑空白后得到的亮藍(lán)譜圖見圖1,果然不是對(duì)稱的色譜峰,而且非但不對(duì)稱,看著還像3個(gè)峰。那么到底是什么原因呢,我們從以下方面進(jìn)行了分析。
(1)標(biāo)準(zhǔn)品問(wèn)題。若標(biāo)準(zhǔn)品純度不高,可能會(huì)帶來(lái)雜質(zhì)干擾,查看亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的證書標(biāo)識(shí)的純度是87.6%,純度不是特別高,但是是某進(jìn)口D公司生產(chǎn)的,無(wú)法確定3個(gè)峰里面是否含有雜質(zhì)峰。
(2)光譜特征。紫外-可見吸收光譜是化合物固有的性質(zhì),一般不同的化合物其吸收特征是不一樣的,因此可以通過(guò)光譜特征對(duì)化合物進(jìn)行定性分析。那么這3個(gè)峰到低是什么物質(zhì)呢,使用DAD檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行200-800nm范圍內(nèi)的掃描,得到的光譜見圖2,由此可見3個(gè)化合物的紫外吸收特征非常相似,在HPLC-UV分析中這種情況一般都是同分異構(gòu)體。
圖2 亮藍(lán)光譜掃描圖
(3)結(jié)構(gòu)特征。那么亮藍(lán)真的有同分異構(gòu)體嗎,亮藍(lán)的結(jié)構(gòu)式見圖3,為非偶氮類酸性染料,主要有3個(gè)同分異構(gòu)體,自然界中常以 3 種同分異構(gòu)體的混合物(間位磺化物:對(duì)位磺化物:鄰位磺化物=75~85: 15~20:0~8)形式存在,因而液相分析的時(shí)候常常得不到單一對(duì)稱的色譜峰。
圖3 亮藍(lán)結(jié)構(gòu)式
(4)定量分析。那么如何對(duì)亮藍(lán)的含量進(jìn)行定量分析是實(shí)驗(yàn)員比較關(guān)心的問(wèn)題,液相色譜定量分析的前提是先分離,嘗試對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行調(diào)節(jié),以減緩洗脫能力,我們發(fā)現(xiàn)這3個(gè)峰是可以實(shí)現(xiàn)基線分離的,比如圖4,圖5,不同色譜條件、不同濃度時(shí)各色譜峰面積結(jié)果以信息見表1。
表1 亮藍(lán)色譜峰面積
由此可以看出,不同的色譜條件,相同濃度的亮藍(lán)3個(gè)色譜峰基線分離和未分離時(shí)峰面積存在一定的差異,但是相同的色譜條件下,在2-100ppm的濃度范圍,各個(gè)亮藍(lán)的同分異構(gòu)體峰面積-濃度的線性關(guān)系較好,可能在不同的色譜條件下,亮藍(lán)的響應(yīng)情況會(huì)有稍微的差異,而在特定的色譜條件下,亮藍(lán)各個(gè)組分的同分異構(gòu)體并不會(huì)發(fā)生很大的轉(zhuǎn)變。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
(1)亮藍(lán)分析時(shí)出現(xiàn)的疑似雜質(zhì)峰其實(shí)是亮藍(lán)的同分異構(gòu)體,亮藍(lán)有3種同分異構(gòu)體。
(2)實(shí)際應(yīng)用中可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模瑳Q定是否要使3個(gè)同分異構(gòu)體*分離,如果測(cè)試的是總的亮藍(lán)含量,把3個(gè)目標(biāo)峰合并在一起計(jì)算,如果是計(jì)算各個(gè)異構(gòu)體的含量就要通過(guò)調(diào)節(jié)色譜條件使其*分離后再定量計(jì)算。