柱層析填料操作方法的選擇:
目前,柱色譜分離的操作方式,主要包括常壓分離、減壓分離和加壓分離3種模式。常壓分離是簡(jiǎn)單的分離模式方便、簡(jiǎn)單,但是洗脫時(shí)間長(zhǎng)。減壓分離盡管能節(jié)省填料的使用量,但是由于大量的空氣通過(guò)填料會(huì)使溶劑揮發(fā),并且有時(shí)在柱子外面會(huì)有水汽凝結(jié),以及有些易分解的化合物也難以得到,而且還必須同時(shí)使用水泵或真空泵抽氣。加壓分離可以加快淋洗劑的流動(dòng)速度,縮短樣品的洗脫時(shí)間,是一種比較好的方法,與常壓柱類(lèi)似,只不過(guò)外加壓力使淋洗液更快洗脫。壓力的提供可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵等。
柱層析填料操作規(guī)程層析柱和凝膠填料是我們實(shí)驗(yàn)室的寶貴財(cái)富,為了方便大家使用和規(guī)范實(shí)驗(yàn)室操作,現(xiàn)將使用規(guī)范規(guī)定如下:
1、使用前先明確自己的分離目的,即要做哪一方面的分離,從而選擇合適的凝膠填料,請(qǐng)大家務(wù)必查閱文獻(xiàn),同時(shí)根據(jù)自己的分離要求,選擇合適長(zhǎng)度和直徑的層析柱;
2、選擇好層析柱和填料以后,嚴(yán)格按照填料的要求來(lái)操作,包括填料的溶脹、脫氣、裝柱,期間務(wù)必嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作;
3、適當(dāng)控制上樣量,上樣以前務(wù)必要過(guò)0.22µm濾膜;
4、選擇合適的流動(dòng)相,根據(jù)膠的性質(zhì)決定能否用泵加壓;
5、使用完畢后,請(qǐng)將層析柱做好處理,將層析柱堵好,以防干膠或者進(jìn)氣泡,同時(shí)請(qǐng)做好試驗(yàn)紀(jì)錄,以便下次用時(shí)方便查詢(xún)使用情況;
6、試驗(yàn)過(guò)程中所有用水或者溶液須經(jīng)過(guò)抽濾和脫氣,嚴(yán)防氣泡。